Perfil sorológico dos pacientes com suspeita clínica de paracoccidiodomicose avaliados pelo Instituto Adolfo Lutz no ano de 2016 / Serological profile of patients with clinical suspicion of paracoccidiodomycosis evaluated by Instituto Adolfo Lutz in 2016

Oitenta porcento dos casos de paracoccidioidomicose (PMC) ocorrem no Brasil. As regiões brasileiras com maior número de casos são: sul, sudeste e centro-oeste, sendo emergente no norte e nordeste. A imunodifusão dupla em gel de agarose assume grande importância no diagnóstico, por permitir o monitoramento da doença e por oferecer subsídios para levantamentos soroepidemiológicos. O objetivo deste trabalho foi de avaliar e caracterizar os pacientes atendidos no Laboratório de Imunodiagnóstico das Micoses do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, em 2016. Trata-se de um estudo retrospectivo realizado utilizando-se dados secundários e avaliando-se as seguintes informações: idade, sexo, procedência do pedido médico, resultado e histórico sorológico dos pacientes. Dos 1.408 pacientes, 12,8% apresentaram reatividade sorológica para Paracoccidioides brasiliensis. Destes, 42,5% não possuiam histórico sorológico, sendo considerados como casos novos da doença. A classificação dos pacientes reagentes por gênero demonstrou que 83,4% eram do sexo masculino, com razão de masculinidade de 5:1. A faixa etária variou de um (1) a 92 anos, e aproximadamente 40% dos pacientes eram da faixa etária de 41 a 60 anos. Este estudo demonstra e reforça a importância da implementação dos estudos soroepidemiológicos como ferramenta auxiliar para nortear as ações de vigilância e políticas em saúde na PCM.

Eighty percent of paracoccidioidomycosis (PMC) cases occur in Brazil. The highest numbers occur in south, southeast and center-west region, being emergent in the north and northeast areas. The double immunodiffusion in agarose gel is valuable for its diagnosis, as it allows the monitoring of the disease and offers subsidies for the seroepidemiological surveys. This study evaluated and characterized the patients attended in 2016 at the Mycoses Immunodiagnosis Laboratory of Adolfo Lutz Institute of São Paulo. This retrospective study, based on the secondary data, evaluated the information: age, sex, medical request origin, result and serological history of the patients. Of 1,408 patients, 12.8% presented positive serological reactivity for Paracoccidioides brasiliensis. Of them, 42.5% had no serological history and they were considered as new cases. The classification of reactive patients by gender showed that 83.4% were males, being the masculinity ratio of 5:1. The age range was one (1) to 92 years old, and ±40% of the patients were of age ranging from 41-60 years old. This study reinforces the importance of the implementation of the seroepidemiological studies as to guide the surveillance actions and the public health politics in PCM.

Increased peripheral blood TCD4+ counts and serum SP-D levels in patients with chronic paracoccidioidomycosis, during and after antifungal therapy

BACKGROUND The main clinical forms of paracoccidioidomycosis (PCM) are the acute/subacute form (AF) and the chronic form (CF), and they both display considerable clinical variability. The immune responses of PCM patients, during and after treatment, remain neglected, mainly in the case of CF patients, due to the high prevalence of pulmonary sequelae. OBJECTIVE To evaluate the distribution of whole blood T cell subsets, serum cytokines, and biomarkers of pulmonary fibrosis in PCM patients, according to the clinical form and at different time points, during the antifungal therapy. METHODS Eighty-seven PCM patients, from an endemic area in Brazil, were categorised into groups, according to the clinical form (AF or CF) and the moment of treatment. The peripheral blood T lymphocyte subsets of these patients were analysed using fluorescence-activated cell sorting. The serum levels of cytokines, basic fibroblast growth factor and surfactant protein-D (SP-D) were also analysed. FINDINGS In the CF patients, an expansion of the peripheral blood TCD4+ cells was observed during the treatment, and this persisted even after two years of antifungal treatment. In addition, these patients showed high serum levels of SP-D. CONCLUSION Our findings highlight the immunological changes CF patients undergo, during and after treatment, possibly due to the hypoxia triggered by pulmonary fibrosis and emphysema.

Recombinant 60-kDa heat shock protein from Paracoccidioides brasiliensis: is it a good antigen for serological diagnosis of paracoccidioidomycosis?

Paracoccidioides brasiliensis and P. lutzii are fungi that cause paracoccidioidomycosis (PCM), the most prevalent systemic mycosis in South America. For serological diagnosis, although 43-kDa glycoprotein (gp43) is regarded as highly specific for PCM, the occurrence of false negative reactions in sera from patients infected with P. lutzii suggests that preparation with only one antigen is not recommended. Heat shock proteins are feasible alternatives as a second antigen because they are often highly immunogenic. In this study, we evaluated the usefulness of recombinant 60-kDa heat shock protein from P. brasiliensis (rPbHsp60) for the serological diagnosis of PCM. Using western blotting assay, we observed that 77.3% of the sera from PCM patients were positive to rPbHsp60, with 90.9% positivity to recombinant gp43 (rgp43). More importantly, sera from healthy subjects had 27% positivity to rPbHsp60 and none to rgp43. When rPbHsp60 was used in ELISA, we did not observe significant differences between the reactions with sera from PCM patients and healthy subjects, while the difference was clearly evident when the antigen was rgp43. Furthermore, rPbHsp60 was recognized by sera from patients with histoplasmosis, aspergillosis, sporotrichosis or tuberculosis in an ELISA test. These results show that rPbHsp60 is not a good antigen for PCM diagnosis.

Serum proteins and fractions, HDL-cholesterol and total IgG and IgE levels in cases of acute and chronic paracoccidioidomycosis / Proteínas séricas e frações, HDL-colesterol e níveis de IgG e IgE totais na paracoccidioidomicose aguda e crônica

This study evaluated serum protein fractions, HDL-cholesterol, total immunoglobulin G and total immunoglobulin E levels in patients with acute and chronic paracoccidioidomycosis, by means of electrophoresis, enzymatic reaction and immunoenzymatic assay. The results demonstrated elevated levels of total immunoglobulin G, total immunoglobulin E, alpha-2 and gamma-globulins, which were more evident in acute than in chronic PCM, but no increase in HDL-cholesterol levels. There was a correlation between the levels of total immunoglobulin E and gamma-globulins and the alpha-2 and beta-globulin fractions in the acute form and between beta and gamma-globulins in both the acute and the chronic form. In conclusion, changes in total immunoglobulin G and immunoglobulin E levels and in the electrophoretic profile may be important markers for the prognosis and therapeutic follow-up of PCM cases, especially because protein electrophoresis is a simple laboratory test that can be applied when specific PCM serological tests are not available. In addition, levels of the gamma-globulin fraction greater than 2.0g/dl may suggest that the patient is developing a more severe form of PCM.

Este trabalho avaliou as frações de proteínas séricas, HDL-colesterol e imunoglobulina G e imunoglobulina E totais em pacientes com paracoccidioidomicose aguda e crônica por eletroforese, reação enzimática e ensaio imunoenzimático. Os resultados demonstraram aumento dos níveis de imunoglobulina G e imunoglobulina E totais, alfa-2 e gama-globulinas, mais evidente na forma aguda que na forma crônica, e não nos níveis de HDL-colesterol. Houve correlação entre níveis de imunoglobulina E total e gama-globulinas e fração alfa-2 e beta-globulinas na forma aguda e entre beta e gama-globulinas nas formas aguda e crônica. Concluindo, alterações nos níveis de imunoglobulina G e imunoglobulina E totais e no perfil eletroforético podem ser importantes marcadores para prognóstico e acompanhamento terapêutico da PCM, especialmente por ser a eletroforese de proteínas um exame laboratorial simples que pode ser empregado em situações onde a sorologia específica para PCM não está disponível. Adicionalmente, níveis da fração gama-globulinas acima de 2,0g/dL podem sugerir que o paciente esteja desenvolvendo uma forma mais grave de PCM.

Human serum antibody reactivity towards Paracoccidioides brasiliensis antigens treated with sodium metaperiodate / Reatividade de anticorpos de soros humanos a antígenos de Paracoccidioides brasiliensis tratados com metaperiodato sódico

In this study, we evaluated the profile of anti-Paracoccidioides brasiliensis immunoglobulin isotypes in serum from patients with the acute and chronic forms of paracoccidioidomycosis, using the whole Paracoccidioides brasiliensis antigen and the antigen treated with sodium metaperiodate. All the immunoglobulin isotypes present in the serum from patients with the acute and chronic forms of paracoccidioidomycosis presented higher reactivity towards the whole antigen than to the antigen treated with metaperiodate (P < 0.05). The reactivity of IgG and IgM to the antigen treated with metaperiodate was greater in serum from patients with the acute form of the disease (P < 0.05), while IgA was more reactive in serum from patients with the chronic form (P < 0.05). There was greater reactivity of IgG1 and IgG2 to the whole antigen and the antigen treated with metaperiodate in the serum from patients with paracoccidioidomycosis than there was in serum from patients with other parasitic infections (P < 0.05). Furthermore, IgG1 from patients with the acute form recognized the 19kDa, 27kDa and 31kDa antigens in the western blot test. Thus, the results suggest that modifications to the epitopes of Paracoccidioides brasiliensis antigens may help to improve the immunodiagnosis of paracoccidioidomycosis.

Neste trabalho, foi avaliado o perfil de isotipos de imunoglobulinas anti-Paracoccidioides brasiliensis em soros de pacientes com formas crônica e aguda de paracoccidiodomicoses usando antígeno total e tratado com meta-periodato. Todos os tipos de imunoglobulinas presentes nos soros de pacientes com formas aguda e crônica apresentaram alta reatividade ao antígeno total quando comparado ao tratado com meta-periodato (P < 0,05). Houve maior reatividade de IgG e IgM anti-antígeno tratado com meta-periodato em soros de pacientes com forma aguda da doença (P < 0,05), enquanto IgA foi mais reativa em soros da forma crônica (P < 0,05). Houve maior reatividade de IgG1 e IgG2 com antígeno total e tratado com meta-periodato em soros de pacientes comparados aos com outras parasitoses (P < 0,05). Além disso, IgG1 de pacientes com a forma aguda reconhecem antígenos de 19kDa, 27kDa e 31kDa por western blot. Assim, os resultados sugerem que alterações nos epitopos de antígenos de Paracoccidioides brasiliensis podem auxiliar no aprimoramento do imunodiagnóstico da paracoccidioidomicose.

Adrenal function in 23 children with paracoccidioidomycosis

Adrenal involvement by Paracoccidioides brasiliensis was described at necropsies and in many clinical studies, but only in adults. Therefore, the aim of this study was to evaluate adrenal function in children with paracoccidioidomycosis. Twenty-three children with the systemic form of paracoccidioidomycosis were evaluated and divided in two Groups: Group A (n = 8) included children before treatment and Group B (n = 15) children after the end of treatment. Plasma cortisol (basal and after ACTH test), ACTH, renin activity, aldosterone, sodium and potassium were measured. They were within normal range in all cases, except for renin activity and aldosterone, which were elevated in some cases. Group A patients showed basal and post-ACTH cortisol levels significantly greater than Group B patients. The results showed that adrenal function was not compromised in these children with paracoccidioidomycosis.

O acometimento adrenal pelo Paracoccidioides brasiliensis é descrito em necropsias e em estudos clínicos, mas apenas em adultos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a função adrenal em crianças com paracoccidioidomicose. Vinte e três crianças com forma sistêmica de paracoccidioidomicose foram avaliadas e divididas em dois grupos: Grupo A (n = 8) pacientes antes de iniciar o tratamento e Grupo B (n = 15) pacientes após o termino do tratamento. Dosagens plasmáticas de cortisol (basal e após teste com ACTH), ACTH, atividade de renina, aldosterona, sódio e potássio foram realizadas. Estas dosagens foram normais em todos os casos, com exceção da atividade da renina e da aldosterona que foram elevadas em alguns casos. Os pacientes do Grupo A mostraram valores de cortisol basal e após-ACTH significativamente maiores que os do Grupo B. Os resultados demonstraram que a função adrenal não foi comprometida neste grupo de crianças com paracoccidioidomicose.

Aspectos laboratoriais evolutivos de crianças em tratamento da paracoccidioidomicose / Laboratory evolutive aspects of children under paracoccidioidomycosis treatment

Estudo de 38 crianças com paracoccidioidomicose, até 14 anos de idade, tratados por 24-30 meses, com um derivado sulfamídico ou cetoconazol, desde o início do tratamento ou em seguida ao uso da anfotericina B. Dados laboratoriais à admissão foram analisados e comparados com exames seqüenciais até 30 meses de acompanhamento. Anemia, eosinofilia e bilirrubinas e aminotransferases elevadas normalizaram-se, na maioria, até os três meses de tratamento e, hipoalbuminemia, até os seis meses, sugerindo que esses achados sejam bons parâmetros para o monitoramento da resposta terapêutica inicial. Leucócitos periféricos, velocidade de hemossedimentação, IgG e títulos sorológicos para o Paracoccidioides brasiliensis estavam elevados e normalizaram-se, freqüentemente, após nove a 12 meses de tratamento, o que sugere utilidade desses exames no monitoramento de todo o tratamento e enfatiza a necessidade de curso terapêutico prolongado da paracoccidioidomicose na infância.

The study of 38 children with paracoccidioidomycosis, aged up to 14, treated for 24 to 30 months with either a sulfonamide derivative or ketoconazole either alone or, after the use of amphotericin B. Laboratory data at admission were analyzed and compared with those of sequential tests after up to 30 months follow-up. Anemia, eosinophilia, increased bilirubin and aminotransferases normalized, in most patients, after three months treatment and hypoalbuminemia normalized after six months, suggesting that these laboratory findings are useful for monitoring early therapeutic response. Peripheral leucocytes, erythrocyte sedimentation rate, IgG, and serological titers for Paracoccidioides brasiliensis were increased and frequently normalized after nine to 12 months of treatment. They may be useful for monitoring the entire treatment and emphasize the need for long term treatment of paracoccidioidomycosis in children.

Evaluation of polymerase chain reaction for the detection of Paracoccidioides brasiliensis DNA on serum samples from patients with paracoccidioidomycosis

The aim of this study was to demonstrate the DNA of Paracoccidioides brasiliensis in human serum samples of patients with paracoccidioidomycosis using the polymerase chain reaction (PCR). The diagnosis of paracoccidioidomycosis (PCM) was defined by microscopic observation of the fungus on direct exam or histopathology, culture, and serological positivity. DNA from serum of 33 patients with PCM was extracted and submitted to nested-PCR using primers from the gp 43 gene. Only one sample was positive on nested-PCR. We conclude that the prevalence of fungemia in patients with different clinical forms of PCM is low, limiting the use of serum DNA detection as an alternative diagnostic tool.

Contribuiçäo para o estudo clínico-laboratorial e terapêutico da formaçäo juvenil da paracoccidioidomicose / Paracoccidioidomycosis: clinical and terapeutic study of the juvenil form of the disease

A paracoccidioidomicose é a micose sistêmica mais frequente na regiäo do Triângulo, no Estado de Minas Gerais. A maioria dos casos diagnosticados nesta localidade enquadra-se na forma adulta da moléstia (idade 30 anos), mas cerca de um terço (36,5 por cento ) do total de doentes corresponde a forma juvenil desta infecçåo (idade 30 anos), modalidade sabidamente de maior gravidade e com feiçöes clínico-laboratoriais bastante peculiares. No presente trabalho, realizou-se um estudo prospectivo com o objetivo de analisar detalhadamente os aspectos clínicos, laboratoriais e terapêuticos da forma juvenil desta micose, em 24 pacientes observados no período de fevereiro de 1982 a dezembro de 1987, no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia. Este estudo permitiu ampla revisäo da literatura latinoamericana sobre o assunto e, com detalhes, destacou as características peculiares, como já referido, desta forma clínica, em particular: a) a raridade da doença na infância, notadamente, na primeira década de vida; b) a baixa proporçäo na incidência entre homens e mulheres (5/1) comparado com a relatada na forma adulta da moléstia (até 125/1); c) o elevado acometimento pelo fungo do sistema macrofágico-linfóide manifestado principalmente por linfadenopatia, localizada ou generalizada, hepatoesplenomegalia e envolvimento do tubo digestivo e do sistema ganglionar-mesentérico; d) a ocorrência menos frequente de lesöes cutâneo-mucosas, comumente vistas na forma adulta da micose; e) a presença de icterícia, ascite e massa abdominal palpável, alteraçÆes decorrentes do envolvimento quase constante do sistema linfático-abdominal; f) a raridade do acometimento pulmonar, habitualmente visto em pacientes de faixas etárias mais elevadas. O trabalho ainda salientou as alteraçöes laboratoriais decorrentes da doença, em particular a eosinofilia, e discutiu os resultados controversos das reaçÆes sorológicas específicas realizadas no decurso desta moléstia. O papel dos métodos de imagem, em particular, da ultrasonografia foi destacado, pelas importantes informaçÆes que trouxe em relaçåo ao acometimento extremamente frequente dos orgåos intra-abdominais pelo P. brasilienses, tendo sido recomendado sua utilizaçåo rotineira na avaliaçäo inicial e evolutiva destes pacientes. Finalmente, este estudo mostrou os resultados terapêuticos obtidos com os sulfamídicos, com a Anfotericina B e, particularmente com o Ketoconazol nesta modalidade da micose, enfatizando a excelente resposta observada com este derivado imidazólico, que permitiu alcançar remissÆes em curtos períodos de tempo e com mínimos efeitos colaterais, mesmo em forma relativamente graves desta doença

Isoniazid acetylating phenotype in patients with paracoccidioidomycosis and its relationship with serum sulfadoxin levels, glucose-6-phosphate dehydrogenase and glutathione reductase activities

Os autores avaliaram o fenótipo acetilador da isoniazida, hematócrito, hemoglobina, atividade da glicose-6-fosfato desidrogenase, glutationa redutase e os níveis séricos de sulfadoxina de 39 doentes com paracoccidioidomicose, sendo 33 do sexo masculino e 6 do feminino, com idades compreendidas entre 17 e 58 anos. Vinte e um (53,84 por cento) doentes apresentaram fenótipo acetilador lento e 18(46,16 por cento) rápido. A atividade da glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) esteve diminuída em 5(23,80 por cento) acetiladores lentos e 4(22,22 por cento) rápidos. A atividade da glutationa redutase esteve diminuida em 14 (66,66 por cento) acetiladores lentos e 12 (66,66 por cento) rápidos. Os níveis séricos de sulfadoxina livre e total foram maiores nos acetiladores lentos (p < 0,02). A análise dos resultados permite concluir que os níveis séricos de sulfadoxina relaciona-se com o fenótipo acetilador. Além disso, os níveis estiveram sempre acima de 50µg/ml, níveis estes considerados terapêuticos. Por outro lado, a deficiência de glutationa redutase pode estar relacionada com a má absorçäo intestinal de nutrientes, entre eles riboflavina, vitamina precursora de FAD